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高壓蒸汽滅菌器滅菌效果的監測

發布:2019-12-13 閱讀:116

    高壓蒸汽滅菌器適用于棉布(簽)、金屬、陶瓷、搪瓷、玻璃、耐熱用品、普通培養基、生理鹽水、手術敷料等的滅菌,是目前醫學及微生物檢測中使用廣泛,安全有效的滅菌方法。利用密閉的耐高壓蒸氣滅菌器(autoclave),在蒸氣不外溢的條件下,使鍋內壓力增高,隨之蒸氣溫度也增高。通常在103.4kPa壓力下蒸氣溫度達到121.3℃,維持15-20分鐘,可殺滅所有的繁殖體和芽胞。高壓蒸汽滅菌方法具有滅菌效果可靠、熱穿透力強、溫度較高、處理后可隨即進行干燥的優點。

    高壓蒸汽滅菌器滅菌效果關系到最終試驗結果的成敗,因此,實驗室要定期對高壓蒸汽滅菌器滅菌效果進行監測,目前監測的方法主要有以下三種:

1.化學指示卡

    化學指示卡上的指示色塊,在高壓蒸氣滅菌時,由淡黃色變為黑色。隨著顏色變化的深淺,并與對照色相比,可判斷滅菌效果是否達到要求。化學指示卡應在干燥處保存。遇潮會變色,影響滅菌效果的觀測。

    化學指示卡只能監測滅菌鍋的滅菌溫度,并不能準確監測滅菌時間,通過顏色變化來達到監測效果。優點是使用方便快捷,缺點是不能準確監測滅菌時間。如果高壓鍋使用的頻率較高,建議每次都在需要滅菌的的材料外側使用過程化學指示卡(包外卡)作為標識。

    化學指示卡分類:從滅菌器的使用層面上分為3類:高、低環氧乙烷(EO)低溫滅菌器包括:過氧化氫等離子體(plasma)滅菌器低溫蒸汽甲醛滅菌器(LTSF))、環氧乙烷(EO)滅菌器。從滅菌化學指示卡本質層面上可分為以下6類

    1類:過程化學指示卡(包外卡)用于單個物品或包裝,指示物品是否經過了滅菌過程,以區分滅菌或為滅菌物品,包括指示膠帶、塑封袋邊緣試紙、生物指示劑標簽等

    2類:特殊檢測化學指示卡(包內卡):用于滅菌器或滅菌標準的特效實驗操作,如各種B-D試紙。檢測預真空滅菌器冷空氣排出效果和飽和蒸汽的穿透效果以及漏氣情況

    壓力蒸汽滅菌器每日使用前必須進行1次BD試驗。方法:將BD試驗專用的化學指示圖平放于實驗包的中心,用雙層包布包裹以后,將測試包水平放置于柜室底層靠近柜門與排氣口處進行實驗。除測試包外,柜內不放置任何物品;在134 ℃,4 min后,取出BD測試紙觀察顏色變化,如BD測試紙變色一致均勻,說明冷空氣排除完全,可以使用;如BD測試紙變色不均勻,說明滅菌器有冷空氣殘留,不能使用,需要檢修。

    3類:單一參數化學指示卡(包內卡):用于滅菌過程中單一參數的測試,如氣體濃度卡(EO、甲醛等)

    4類:多參數化學指示卡(包內卡)具有兩個或兩個以上關鍵參數(時間、溫度、濕度、氣體濃度、蒸汽飽和程度)

    5類:綜合參數化學指示卡(包內卡)是一種專用于對各滅菌過程中規定范圍內的所有參數起作用的指示卡,其設定值需達到滅活值。它檢測的滅菌過程關鍵參數應等于或超過標準ISO 1138對生物指示物的性能要求。性能等同或高于生物指示物。

    6類:模擬化學指示卡(包內卡)用于對各滅菌周期的所有評價參數起作用的指示卡,其設定值以所選的滅菌程序設置值為依據。周期確認型指示劑:是滅菌循環驗證指示物。它的參數最精確。不同的指示劑必須要于每一不同的周期中,印有顏色變化染料的紙片

    4、5、6類放在每一滅菌包內,用于檢測小范圍問題,不能提示整批次微生物已被殺滅,批次檢測需要用化學批量PCD(有植入型物品是需同時放入生物監測指示劑)

2.留點溫度計

    留點溫度計包括雙金屬留點溫度計水銀留點溫度計實驗室用的工業留點溫度計,設計的溫度要比體溫計高得多,一般是在負10度至300度之間。

    水銀留點溫度計是指水銀柱指示的位置不隨著溫度的下降而下降,仍留在并指示著曾經達到過的最高點。像我們所用的體溫計就是這樣一種溫度計,留點溫度計需經檢定合格后方可用于驗證試驗。檢測前,需將溫度計的水銀柱甩至40℃以下把水銀溫度計放在盛水的大三角瓶里,滅菌時把三角瓶放在滅菌器的上部和下部,滅菌結束后看水銀溫度計的溫度和要求溫度是否一致。每次監測后留點溫度計的溫差應在1℃之間,則說明滅菌器內的溫度分布是均勻的。

    如果高壓鍋使用的頻率較高,建議每個月用留點溫度計對高壓鍋滅菌效果進行監測。

3.生物指示劑

    生物指示劑是一類特殊的活微生物制品,可用于確認滅菌設備的性能,滅菌程序的驗證,生產過程滅菌效果的監控等。

    生物指示劑(嗜熱脂肪芽孢桿菌菌片)(以下簡稱菌片)用無菌鑷子放人密封試管中,置于試驗包中心部位,化學指示卡和留點溫度計放入敞口試管中。以上兩種試管各準備5-10份。分別放置在高壓滅菌器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處。如滅菌器為二層,則需放10處。

滅菌后的菌片應在嚴格無菌操作條件下放入滅菌后的溴甲酚紫胨水培養基內56±2℃溫度培養24-48小時,觀察顏色變化。如培養基變為黃色,說明菌片中的嗜熱脂肪芽胞桿菌尚未完全滅活,細菌仍可在培養基中生長,分解葡萄糖產酸變為黃色。如培養基顏色不變化仍為紫色,則說明芽胞已滅活。同時要用未經滅菌的紙片放入培養基內作為陽性對照,不加紙片的空白培養基作為陰性對照。  

1)按結構分可分為片狀生物指示劑和自含式生物指示劑。一般來說都是用的自含式的多,就是里面有菌片,外面是密封的安瓿。

    2)按培養時間可分為通用型生物指示劑和快速型生物指示劑。通用型生物指示劑根據芽孢復蘇后指示菌種新陳代謝引起培養液pH改變,通過酸堿指示劑變色來進行判讀,時間一般在24或48小時以上;而快速型生物指示劑根據芽孢復蘇后的酶促反應,通過熒光進行判讀,時間一般為3-4小時,同時國外正在研發更加快速的生物指示劑,有望在1小時之內得出結果。

    生物指示劑也是GB15981-1995《消毒與滅菌效果的評價方法與標準》中推薦使用的壓力蒸汽滅菌效果的監測方法。優點是能夠準確監測滅菌溫度和時間是否滿足滅菌要求,缺點是檢測鑒別所需時間較長。

 

示例:

嗜熱脂肪芽孢桿菌生物指示劑
型號:H3723
用途∶適用于醫院消毒、檢驗檢測、衛生材料生產企業等機構
指標菌∶Geobacillus stearothermophilus嗜熱脂肪芽孢桿菌
芽孢數∶1×105以上
包裝∶25支/盒
壓力蒸汽滅菌生物指示劑又名嗜熱脂肪芽孢桿菌生物指示劑,是由嗜熱脂肪桿菌芽孢菌片(ATCC7953)、培養基及塑料外殼組成自含式生物指示劑。菌片含菌量為1×105~5×105cfu/片。D值為1.3~1.9分鐘。在121℃±0.5℃飽和蒸汽條件下,存活時間≥3.9分鐘,殺滅時間≤19分鐘。 

使用方法

1.在ACE test(滅菌生物指示劑表面的標簽空白處,用油性筆記錄滅菌管理的必要事項。(如:滅菌處理日期、位置等)根據標簽的化學指示劑變化,可區分有否經滅菌處理。 
2.將ACE test數支橫放在滅菌器內不易被滅菌完全的位置。
3.滅菌處理后,將ACE test取出,確認標簽上的化學指示劑由藍色變成黑色后,放置15分鐘以上冷卻至室溫。
4.將完全冷卻后的ACE test垂直放入夾子中,直到塑料管底部完全安定,手指按夾子上部將內部玻璃管夾破。此階段吸附芽孢的紙片接觸培養液,培養準備完畢,請確認紙片是否浸在培養液中并及時培養。
5.在56±2℃溫度間將ACE test豎著進行培養。為了便于對照,用同一批號未使用的ACE test,在玻璃管夾破后,同時進行培養。經24小時、48小時或7天培養,可確認滅菌效果
6.確認滅菌效果后,將標簽取下粘貼在記錄薄留存。

(檢驗分析中心)

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